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氨基酸衍生步骤复杂?88858cc永利官网为您提供解决方案!

发布时间:2025-01-23   信息来源:尊龙凯时官方编辑

88858cc永利官网的产品简介:衍生化是一种关键技术,主要用于提高目标物质的可检测性和检测器对目标物质的响应。在弱碱性溶液中,OPA(邻氨基苯甲醛)和3-MPA(3-巯基丙酸)可与氨基酸中的羰基和氨基发生反应,生成荧光衍生物。经过紫外光激发后,这些衍生物将发射出比激发光波长更长的光,形成荧光信号。荧光强度与氨基酸浓度成正比,从而实现对样品中氨基酸含量的准确计算。这一方法具备快速测定、准确度高、灵敏度强及适用范围广等诸多优势。

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产品信息:

货号:SDK1010
名称:氨基酸衍生化试剂盒(OPA法,不含标准品)
规格:25T/50T
储存条件:2-8℃
注:更多信息,请联系88858cc永利官网网站负责人。

实验步骤:

1. 流动相A的配制:取适量超纯水,在瓶内溶解流动相A1、A2和A3,移至1L容量瓶中,并用超纯水清洗瓶壁1-2次,保证试剂充分溶解。最后,用超纯水定容至1L,混匀后过022μm有机相膜待用。

2. 流动相B的配制:在瓶内用超纯水溶解流动相B,移至1L容量瓶中,冲洗瓶壁1-2次,然后加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈,最后用超纯水定容至1L,混匀后过022μm有机相膜待用。

3. 超声处理:将配制好的流动相A和B超声处理30分钟,以去除溶剂中的气体,避免色谱柱堵塞,影响结果。

4. 标准溶液的配制:取一定量氨基酸标准品,使用0.1M HCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液,并过022μm水相膜。

5. 衍生试剂的配制:取60mg试剂一,加入0.5mL试剂二、4.5mL试剂三和50μL试剂四,混匀并避光待用。此配方可得约5mL的衍生化试剂,足以进行25次手动衍生,具体配制量可根据需求调整。

6. 仪器准备:开启电脑与液相色谱仪各模块开关(使用FLD检测器),安装C18色谱柱(46×250mm,耐水性≥90%)。在软件中设置柱温为35℃,流速为1mL/min,激发波长(λex)为340nm,发射波长(λem)为450nm,洗脱程序按下表设置,走样时间60分钟,设置完成后保存方法组。

7. 样品进样前:用初始流动相(流动相A:流动相B=90:10)平衡色谱柱30分钟或更长,待基线稳定后开始进样。

8. 自动衍生:设定进样程序,吸取1μL氨基酸标准溶液、2μL衍生试剂和2μL试剂三,混合5次,等待1分钟后进样。

9. 手动衍生操作:若色谱仪无自动衍生功能,可手动操作,吸取100μL氨基酸标准溶液,加入200μL衍生试剂和200μL试剂三,涡旋混合后静置1分钟,过022μm有机相膜,上样。

10. 实验空白对照:使用等量0.1M HCl重复上述步骤,以排除潜在干扰。

检测结果示例:

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