随着生物医学领域的快速发展，深入理解和精准测量免疫系统的功能变得愈发重要。在这一背景下，酶联免疫斑点技术（ELISpot）作为一种高效的技术手段，发挥了重要作用。通过ELISpot，研究人员可以准确定量分析单一免疫细胞分泌的细胞因子或其他分子，为免疫应答的研究开辟了新的思路。本期推文，88858cc永利官网将引领大家探索ELISpot的奥秘，揭示免疫反应背后的秘密。

ELISpot技术简介

酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked ImmunoSpot Assay，ELISpot）是一种基于ELISA原理创新而成的细胞检测技术。ELISpot的历史可以追溯到1978年，当时牛津大学的Don Mason教授首次开发了“胶片上的斑点技术”，旨在检测抗体分泌细胞。1983年，科学家JD Sedgwick和C Czerkinsky独立发展了ELISpot技术，引入酶联免疫的理念，并将其应用于斑点形成的技术中，显著提高了技术的实用性和灵敏度。ELISpot可以检测单个细胞分泌的细胞因子或抗体，能够对样本中活细胞的免疫状态进行动态评估。

ELISpot技术的主要原理是，将细胞培养在涂有特异性捕获抗体的PVDF板上，细胞分泌的靶蛋白会被这些抗体捕获。经过适当的孵育后，去除细胞并添加生物素化抗体，最终通过酶促显色反应形成斑点。ELISpot具备高灵敏度、高通量筛选、活细胞功能评价及操作简单等优点，广泛应用于疫苗研究、药物筛选、感染性疾病的诊断与研究、肿瘤免疫研究、自身免疫疾病研究、过敏研究以及移植排斥反应的预测等多个免疫相关领域。

ELISpot技术的进阶版——FluoroSpot

FluoroSpot是在ELISpot的基础上发展而来的新技术，采用荧光检测方式来替代比色法。通过将不同波长的荧光标记物混合在一起，结合滤光片，可以实现对多种细胞因子的精确检测。这种新技术不仅保留了ELISpot的高灵敏度，还能够同时分析多个细胞群体分泌的不同细胞因子。以三色FluoroSpot为例，在96孔板的PVDF膜上同时包被IFN-γ、IL-17A和IL-22因子的捕获抗体，并使用不同发射波长的荧光素标记，生成不同颜色的荧光斑点，便于对三种因子的斑点进行计数和数据分析。

ELISpot与ELISA对比

从技术本质上看，ELISpot和ELISA都是基于双抗夹心法原理，但两者的目的不同。ELISA旨在定量测定样本溶液中靶标蛋白的浓度，而ELISpot则是对样本中活细胞的免疫状态进行动态的检测评估。在了解了这两种技术的区别后，大家对ELISpot必然有了更为全面的认知。凭借其独特的优势，ELISpot在疫苗开发、肿瘤免疫治疗等领域展现了巨大的潜力。随着科学技术的不断进步，88858cc永利官网相信ELISpot将为人类健康事业作出更大贡献。更多ELISA相关知识，请持续关注88858cc永利官网！