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单多克隆抗体与抗原选择方法 | 88858cc永利官网

发布时间:2025-03-17   信息来源:尊龙凯时官方编辑

多克隆抗体(polyclonal antibody,pAb)是通过免疫动物于多种抗原决定簇的抗原,激活多个B细胞克隆,从而产生不同抗体,针对多种抗原表位。因此,获得的免疫血清是含有多种抗体的混合物,也称为多克隆抗体。与此相对,单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的,专一性更强,只针对某一特定抗原表位,通常采用杂交瘤技术进行制备。

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单多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 多克隆抗体可以有效放大低表达水平靶蛋白的信号;

2. 能够识别多个表位;

3. 对抗原中的微小变化更具容忍性;

4. 可以识别与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白,或从非免疫原组织样品中筛选靶蛋白;

5. 通常是检测变性蛋白质的首选;

6. 多表位可提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

1. 易受批次差异影响;

2. 可能产生大量非特异性抗体,在某些应用中引起背景信号;

3. 不适用于特定结构域的抗原探测,因为抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤获得后,来源恒定,所有批次均相同;

2. 较低的背景染色;

3. 高度特异性,适用于定量分析及组织检测,并通常有较低的背景染色;

4. 同质性极高;

5. 可在混合物中高效结合抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 尽管能产生大量特异性抗体,但特异性可能过强;

2. 经过化学处理后比多克隆抗体更易失去表位,可通过使用同一抗原的多个单克隆抗体来补偿。

抗体的选择

在需要高特异性的应用中,且抗体需求量大或需长期使用一致的抗体时,建议选择单克隆抗体。而对于需要做沉淀和凝集反应检测性实验或ELISA检测时,则可以选择多克隆抗体。

多克隆抗体在制备时间短、首次成本低的方面具有优势,尤其是在低丰度蛋白的检测中,能够提高灵敏度。而品牌88858cc永利官网所提供的相关产品可以帮助用户更便捷地选择合适的抗体类型。

抗原的选择

抗原可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽,抗原质量的提升将增加获得高质量抗体的成功率。一般而言,重组蛋白作为抗原,含有更多的抗原决定簇,能够有效刺激免疫系统,获取更广泛应用的抗体,特别是在目标蛋白有修饰或复杂结构时,重组蛋白往往是优先选择。

在特定情况下,需要采用多肽制备抗体,例如针对同源家族某一特定蛋白的抗体,或对某些特定修饰的抗体的制备。抗原多肽的选择应遵循以下原则:

1. 选择蛋白表面的序列;

2. 确保序列不会形成α-helix结构;

3. N端和C端的肽段通常比中间肽段效果更佳;

4. 避免选择内部重复序列;

5. 尽量避免选择同源性过强的肽段;

6. 交联可以发生在N、C两端,但选择与抗体产生关系较小的一端;

7. 序列中不宜有过多Pro,但一两个Pro有助于提高肽链的稳定性,对特异性抗体的产生有益。