一、细胞培养条件

细胞名称: 生长特性: 贴壁生长

冻存条件: 无血清冻存液

培养体系: 1640 + 10% FBS + 1% P/S + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺

传代方法: 第一次建议1:2传代

传代情况: 2天换液

备注: 用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买88858cc永利官网的完全培养基。

二、细胞处理步骤

接收到细胞后，待其培养至良好状态后，将完全培养液灌满并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放入超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行进一步操作。建议显微镜下观察细胞生长情况，并采用不同倍数拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片，默认为收到状态良好。

（传代后建议使用原瓶的完全培养基与自配的完全培养基对比培养，换液时将瓶盖松开。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度低于80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，保存5ml，再放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，需进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1ml88858cc永利官网品牌的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存。如需转入液氮罐，须在-80℃冰箱存放24小时以上再转入。

四、细胞复苏

从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养；第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题后可重发的情况及判定标准：

遭遇细胞运输问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等，均可重发。
如细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时内，若多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
若干冰发货细胞复苏24小时后或常温发货细胞静置4小时后发生污染，可重发。
细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果并通过台盼蓝鉴定细胞活力，经核实后可重发。
在收到细胞当天及第2、3天拍照，如3天未通知，则视为产品合格。如果在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片及操作步骤，由技术人员判断责任后予以重发。

2）细胞出现问题，不予以重发的情况：

客户造成的细胞污染不予重发。
客户操作不当导致细胞状态不佳不予重发。
使用非推荐的培养体系导致细胞状态不佳不予重发。
细胞状态不佳且未提供培养前3天照片不予重发。
细胞培养中经过其他处理的不予重发。
在收到细胞2天内未报告问题的不予重发。
具体情况由客服视情况而定。

以上为88858cc永利官网的细胞培养及售后说明，请仔细遵循以确保细胞的健康生长。